Biodiesel merupakan bahan bakar terbarukan, yang biasanya diproduksi melalui proses esterifikasi diikutidengan transesterifikasi kimia. Produksi biodiesel menggunakan katalis enzim lipase telah mulai dikembangkan. Tetapi penggunaan enzim lipase terkendala dengan mahalnya harga lipase dan hanya dapat digunakan untuk satu kali reaksi. Dengan ambolisasi lipase akan meningkatkan produktivitas lipase sehingga lipase dapat digunakan kembali. Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui kondisi produksi biodiesel dari CPO (Crude Palm Oil) dan metanol sebagai bahan baku, menggunakan katalis enzim lipase (Pseudomonas fluorescens) amobil. Produksi biodiesel dilakukan dengan mereaksikan CPO dan metanol dengan penambahan enzim lipase arnobil, Amobilisasi lipase menggunakan carrier I matrik kaolin dan celite. Hasil penelitian didapatkan bahwa untuk produksi biodiesel dengan bahan baku CPO dan methanol dapat dilakukan dengan menggunakan katalis enzim lipase Pseudomonas fluorescens amobil, menggunakan perbandingan molar CPO dan methanol adalah1 : 6 dan suhu di atas 50°C. Amobilisasi lipase dengan matriks terbaik berdasarkan persentase protein yangterikat pada matriks menggunakan kaolin yaitu sebesar 1,36 mg/mL. FAME dominan yang diperoleh adalah metil eser palmitat dan metil ester oleat. yang masing-masing berasal dari asam palmitat dan asam oleat yang merupakan asam lemak utama penyusun CPO.